Functional integrity of Colossoma macropomum (Cuvier, 1816) sperm cryopreserved with enriched extender solutions

Cryoprotectant solutions are used to protect the sperm from alterations caused by the low temperature in the cryopreservation process. We evaluated the quality of Colossoma macropomum semen after freezing, using dimethyl sulfoxide (DMSO) as a cryoprotectant, combined with two extender solutions (T1 - Solution 1: Glucose 90.0 g/L, Sodium Citrate 6.0 g/L, EDTA 1.5 g/L, Sodium Bicarbonate 1.5 g/L, Potassium Chloride 0.8 g/L, Gentamycin Sulphate 0.2 g/L, and T2 - Solution 2: Glucose 90.0 g/L, ACP(r)-104 10.0 g/L). Motility rate and motility time did not differ between T1 and T2 and were lower than fresh semen. The number of normal sperm was significantly different in treatments T1 (15.1%) and T2 (21.9%), and both showed a reduction in the percentage of normal sperm compared to fresh semen (57.4%). The values found for the rates of fertilization and hatching, mitochondrial functionality and sperm DNA, did not differ between the treatments (T1 and T2). Regarding membrane integrity, there was a higher percentage of spermatozoa with intact membranes in T1 (53.4%) than T2 (43.7%). The extender solutions, combined with 10% DMSO, maintained the sperm DNA intact in almost all the C. macropomumsperm cells, however there was a loss in their functionality.

As soluções crioprotetoras são utilizadas para proteger os espermatozoides das alterações causadas por baixas temperaturas durante o processo de criopreservação. Avaliamos a qualidade do sêmen de Colossoma macropomumapós o congelamento, utilizando dimetilsulfóxido (DMSO) como crioprotetor, combinado com duas soluções diluidoras (T1 - Solução 1: Glicose 90,0 g/L, Citrato de Sódio 6,0 g/L, EDTA 1,5 g/L, Bicarbonato de Sódio 1,5 g/L, Cloreto de Potássio 0,8 g/L, Sulfato de Gentamicina 0,2 g/L, e T2 - Solução 2: Glicose 90,0 g/L, ACP(r)-104 10,0 g/L). A taxa de motilidade (%) e o tempo de motilidade (s) não diferiram entre T1 e T2, porém foram mais baixos do que no sêmen fresco. O número de espermatozoides normais foi significativamente diferente nos tratamentos T1 (15,1%) e T2 (21,9%), e ambos mostraram uma redução na porcentagem de espermatozoides normais, comparado ao sêmen fresco (57,4%). Os valores encontrados para as taxas de fertilização e eclosão, funcionalidade mitocondrial e DNA do esperma, não diferiram entre os tratamentos (T1 e T2). Para a integridade da membrana, houve uma porcentagem mais elevada de espermatozóides com a membrana intacta em T1 (53,4%) do que T2 (43,7%). As soluções diluentes combinadas com DMSO a 10% preservaram o DNA espermático intacto em quase todas as células do sêmen de C. macropomum, mas houve perda na funcionalidade dos mesmos.

Variação estacional na qualidade do sêmen de carneiros Lacaune no Brasil / Seasonal variation in semen quality of lacaune rams in Brazil

Little is known regarding the seasonal semen production of Lacaune rams in southern Brazil. Thus, the aim of this study was to evaluate semen quality and production of Lacaune rams maintained in Rio Grande do Sul (RS). Semen was collected using an artificial vagina, from 12 rams (1 to 4 years of age), kept under intensive conditions. The quantitative and qualitative characteristics of the semen and scrotal circumference of each ram were recorded, from the winter of 2002 to the spring of 2003. Seasonal variations were recorded in almost all the monitored semen characteristics and in scrotal circumference. Sperm concentration was the only semen characteristic evaluated that did not show seasonal variation. Sperm volume varied between 1.1 ± 0.4 mL (winter of 2002) and 1.5 ± 0.4 mL (autumn of 2003). Total number of sperm per ejaculate varied between 4.0 ± 3.3x109 (winter of 2002) and 5.7 ± 3.3x109 (summer of 2003). For scrotal circumference records, in 2002 significant differences between seasons were observed. Significant differences were also found in accordance with the age of rams (P < 0.05) in the winter of 2002. Results showed improvement in motility, concentration and volume of the sperm during summer and autumn when compared to spring and winter. So, in this region of Brazil summer and autumn are the more indicated seasons to maximize the utilization of Lacaune rams for reproductive practices. Further studies must be done to evaluate Lacaune semen freezability in these seasons of the year.

Existem poucos dados sobre a produção de sêmen da raça Lacaune, no sul do país. Assim, o objetivo deste estudo foi o de avaliar a produção e a qualidade do sêmen de carneiros desta raça, criados no estado do Rio Grande do Sul (RS). Foram utilizados 12 carneiros, de idades entre 1-4 anos, criados em condições intensivas. O sêmen foi colhido por vagina artificial e foram avaliadas as características quantitativas e qualitativas e a circunferência escrotal, do inverno de 2002 até a primavera de 2003. Com exceção da concentração espermática, foram observadas variações estacionais em todas as características estudadas. O volume variou de 1.1 ± 0.4 mL, no inverno de 2002, a 1.5 ± 0.4 mL no outono de 2003. O número total de espermatozóides por ejaculado variou de 4.0 ± 3.3x109 (inverno de 2002) a 5.7 ± 3.3x109 (verão de 2003). Observou-se variação estacional significativa (P < 0,05) na circunferência escrotal em 2002, bem como variação significativa entre as idades dos animais, no inverno do mesmo ano. Os valores médios da produção espermática observados no verão e o outono foram superiores aos obtidos no inverno e primavera. O verão e outono foram considerados as estações mais indicadas para a utilização de machos da raça Lacaune em programas reprodutivos, no RS. Mais estudos devem ser conduzidos, para a verificação de efeitos estacionais sobre o congelamento do sêmen.

Criopreservação de espermatozóides eqüinos comparando duas curvas de congelamento combinadas com diluentes comerciais: uma análise laboratorial / Cryopreservation of equine spermatozoa comparing different freezing rates combined with commercial extenders: laboratorial analysis

Durante o processo de criopreservação de sêmen, os espermatozóides sofrem alguns danos que resultam na diminuição da fertilidade deste. O presente estudo foi realizado com o objetivo de avaliar os efeitos da utilização combinada de duas curvas de congelamento com dois diluentes comerciais (FR-5® e Botu-Crio®) sobre a criopreservação de sêmen eqüino. Foram analisados 20 ejaculados de dois garanhões. As amostras foram avaliadas por microscopia de contraste de fase e microscopia de epifluorescência, observando-se a motilidade progressiva e total do sêmen pós-descongelamento e a integridade e a funcionalidade da membrana dos espermatozóides. A combinação entre curva automatizada e Botu-Crio® apresentou as maiores médias nas análises de motilidade total e progressiva, após o descongelamento. O diluente Botu-Crio®, isoladamente, preservou também as membranas destes, quando foram realizadas as análises de integridade utilizando teste com diacetato de carboxifluoresceína e iodeto de propídio e funcionalidade de membrana pelo teste hiposmótico.

During semen cryopreservation, sperm cells were submitted to several deleterious events leading to membrane damage which result in fertility decrease. This study was designed to compare the effects of two freezing techniques (conventional and automated), and the use of two commercial extenders as cryoprotectants (FR-5® and Botu-Crio®) on total and progressive motility, integrity and functionality of spermatic membranes during the cryopreservation of equine semen. Twenty ejaculates from two stallions were analyzed. The total and progressive motility of fresh and post-thawing semen samples were evaluated by patterns assays. Function of plasmatic membrane was measured by the hipoosmotic swelling test. Integrity of plasmatic membrane was evaluated using carboxifluorescein diacatate and iodidium propide fluorescent probes. There were significant differences between the two freezing techniques and/or between cryoprotectants for all assessed parameters. The combination of Botu-Crio® and automated curves showed better results on total and progressive post-thawing motility. The extender Botu-Crio®, alone, showed to better preserve the membrane integrity and function.